... AVL einen seiner Erzfeinde, niemand Geringeren als Maxime Le Mal, unschädlich machen und seiner gerechten Strafe zuführen konnte, währt der Frieden leider nicht lang. Le Mal entkommt aus dem Gefängnis, weshalb die AVL kurzerhand beschließt, Gru und seine mittlerweile um Baby Junior angewachsene Patchwork-Familie in eine Art Zeugenschutzprogramm aufzunehmen und unter neuen Identitäten in die idyllische Vorstadt Mayflower umzusiedeln. Während Grus Frau Lucy und die drei Adoptivtöchter Margo, Edith und Agnes mehr schlecht als recht Fuß zu fassen versuchen, wird Gru von Nachbarstochter Poppy erkannt und erpresst: Er soll ihr dabei helfen, selbst eine gefürchtete Schurkin zu werden, indem er mit ihr in sein altes Internat einbricht und dessen Maskottchen, einen bissigen Honigdachs, stiehlt. AVL-Chef Ramspopo lässt fünf ausgewählte Minions derweil mittels eines Serums zu Mega-Minions mutieren, die ihre neuen Kräfte jedoch nicht ganz wie gewünscht einzusetzen verstehen. Und zu allem Überfluss hat Le Mal nicht nur Rache geschworen und ist der Familie auf den Fersen, sondern ist auch eine Mutation mit einer Kakerlake eingegangen…